第(3/3)页 “很好,那么文库制备这块工作就由鲍勃来负责,梅林你和瑟琳在完成其他步骤之后进行协助就好了。” 接下来的几天,经过不断的磨合。 这个四人小团队才逐渐走入了正轨。 没办法,和陆时羡这种以前熟练掌握过的不一样,在这项技术上,三人几乎是从头开始学习。 而且就这还只是前置准备工作,就几乎花费了一个星期的时间。 “你们之前已经知道在片段化操作中,这个过程是随机的,因此可能会出现平齐的末端,也有可能出现不平的末端,因此要进行末端修复,将产生的所有的3'或5'突出黏性末端转化成平末端。”陆时羡正解答着来自鲍勃的问题, 经过对新技术的不断上手操作,再结合他以前的实验经历,彼此碰撞之下,鲍勃产生了一些疑惑。 他的问题是:“末端修复加a碱基很好理解,是为了产生粘性末端,但进行接头连接全过程都要用到t4dna聚合酶,让他有些不解。 这个问题比较基础,只能说鲍勃之前没有留意聚合酶的各种作用。 但陆时羡也没不耐烦,认真的回答道:“那是因为t4dna聚合酶全程都在起作用,它的原理是不仅能够从5'至3'方向催化合成dna,补平5'突出末端,也具有3'至5'外切酶活性,帮助对3'突出末端进行切平,最后将黏性末端dna片段转变为平末端dna。” 紧接着,梅林也贡献了一个问题。 他颇为疑惑地问道:“我们的样本里面含有的rna中最多的是rrna,如果直接对最后得到的rna文库进行测序,那么数据里面可能会存在rrna的测序数据,这个数据我怕会有一些误差啊?” 陆时羡不断在心中点头。 梅林能想到这一点,足以见到他思维的连贯性。 没办法,这个问题确实问的很关键,几乎决定了测序工作成功与否。 而他之前都没有主动提及这一环,是想着自己亲自上手处理时候在说一下的。 但现在既然有人说到这,提前一下也不是不行。 事实上,梅林的判断还是有些保守了。 dengbi.net dmxsw.com qqxsw.com yifan.net shuyue.net epzw.net qqwxw.com xsguan.com xs007.com zhuike.net readw.com 23zw.cc 第(3/3)页